Subaru Hasegawa ma ambicję, by zostać jednym z największych koszykarskich supergwiazd wszech czasów. Jednak ten sen wydaje się zderzyć z rzeczywistością, gdy szkolna drużyna koszykówki zawiesza działalność na rok. Zszokowany tą wiadomością, postanawia całkowicie zrezygnować z koszykówki. Jednego dnia jego ciotka Mihoshi Takamura prosi go o szkolenie żeńskiej drużyny koszykówki z Keishin Academy, ucząc dziewczyny gry w ten sport, na co niechętnie się zgadza. Poznaje uczennice szóstej klasy: Tomokę Minato, Maho Misawę, Airi Kashii, Hinatę Hakamadę oraz Saki Nagatsuki i zaczyna je szkolić z jednym celem: pokonanie każdego silnego przeciwnika, na jaki natkną się. Ro-Kyu-Bu! opowiada o wysiłkach pięciu dziewczynek ze szkoły podstawowej i ich trenera, które udoskonalać swój uroczy styl gry w koszykówkę.